乳腺癌HER2 FISH检测判定标准

日期:2021-01-09 09:01
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摘要: FISH技术通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交GD真人GD真人。在荧光显微镜下观察并分析细胞核内杂交于DNA靶序列的探针信号GD真人GD真人GD真人,以获得细胞核内染色体(或染色体片段)上基因状态的信息。目前进行HER2基因状态检测的探针多为同时含有HER2基因和该基因所在的第17号染色体着丝粒(CEPl7)序列的双探针GD真人,也可采用仅含有HER2基因的单探针。 1.观察程序:应在低倍镜下观察整张FISH切片GD真人,初步判断检测质量以及是否存在HER2扩增的异质性GD真人。要求至少找到2个浸润癌区域,计数至少20个浸润癌细胞。也可以参照IHC切片先确定可能存在扩增的浸...


FISH技术通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交GD真人。在荧光显微镜下观察并分析细胞核内杂交于DNA靶序列的探针信号GD真人,以获得细胞核内染色体(或染色体片段)上基因状态的信息。目前进行HER2基因状态检测的探针多为同时含有HER2基因和该基因所在的第17号染色体着丝粒(CEPl7)序列的双探针,也可采用仅含有HER2基因的单探针。


1.观察程序:应在低倍镜下观察整张FISH切片,初步判断检测质量以及是否存在HER2扩增的异质性GD真人GD真人。要求至少找到2个浸润癌区域GD真人GD真人,计数至少20个浸润癌细胞GD真人。也可以参照IHC切片先确定可能存在扩增的浸润癌区域GD真人GD真人GD真人,然后于100倍物镜下通过特异通道滤光片观察HER2和CEP17信号GD真人GD真人,并进行信号计数和比值计算。


2.结果判读及注意事项:应选择细胞核大小一致GD真人GD真人GD真人、核的边界完整、二脒基苯基吲哚(DAPI)染色均一GD真人、细胞核无重叠GD真人GD真人GD真人、信号清晰的细胞GD真人。随机计数至少20个浸润癌细胞核中的双色信号GD真人。在观察信号时,应根据情况随时调节显微镜的焦距GD真人GD真人,准确观察位于细胞核不同平面上的信号以免遗漏。判读标准如下图--双探针ISH:



(1)当HER2/CEP17比值≥2.0时GD真人GD真人,为HER2阳性GD真人GD真人GD真人;HER2/CEP17比值<2.0,但平均HER2拷贝数/细胞≥6.0时也为HER2阳性GD真人。扩增细胞应均质GD真人、连续GD真人GD真人GD真人,且占浸润癌的10%以上。需要注意的是对于HER2/CEP17比值≥2.0GD真人,但平均HER2拷贝数/细胞<4.0的病例是否应该视为ISH阳性目前尚存一定争议GD真人GD真人。建议对这部分病例在报告中加以备注GD真人,提示目前的认识争议GD真人GD真人,建议临床医师参考IHC检测结果并与患者进行必要的沟通GD真人GD真人。


(2)HER2/CEPl7比值<2.0且平均HER2拷贝数/细胞<2.0时为HER2阴性GD真人GD真人。


(3)HER2/CEP17比值<2.0且平均HER2拷贝数/细胞<6.0GD真人,但i>4.0时为HER2 ISH结果不确定GD真人GD真人GD真人。单探针ISH:肿瘤细胞平均HER2拷贝数/细胞<4.0为无扩增GD真人;肿瘤细胞平均HER2拷贝数/细胞≥6.0为扩增GD真人GD真人。扩增细胞应均质GD真人GD真人、连续GD真人GD真人GD真人,且占浸润癌的10%以上GD真人GD真人GD真人。平均HER拷贝数/细胞在4~6之间为不确定GD真人。若众多HER2信号连接成簇时可不计数,直接视为基因扩增GD真人。对于ISH结果不确定的病例.需要再计算20个细胞核中的信号或由另外一位分析者重新计数。如仍为临界值GD真人,则应行IHC检测(若FISH前未行),也可以选取不同的组织块重新检测GD真人。建议在HER2 FISH检测报告中包括如下内容:患者信息(包括姓名GD真人、性别GD真人GD真人、年龄GD真人、门诊/住院号)GD真人、送检医师姓名GD真人、送检日期GD真人GD真人、标本信息(包括病理号和蜡块号)GD真人、标本部位和类型GD真人、探针信息GD真人、检测方法、是否使用图像分析、对照设置情况GD真人、样本量是否适合评估、判读结果(包括评估的细胞数量GD真人、平均HER2拷贝数/细胞GD真人、平均CEPl7拷贝数/细胞GD真人、平均HER2拷贝数/平均CEPl7拷贝数的比值)GD真人GD真人、检测结论(如阳性GD真人GD真人、不确定GD真人、阴性GD真人、无法判读)。


3.质量控制:(1)内对照:使用上述同时含有HER2基因和CEPl7序列的混合探针时GD真人,组织中≥75%的细胞核显示出双色信号时视为杂交成功GD真人,并且双色信号互为对照GD真人,癌与非癌细胞互为对照。出现下列情况时应视为FISH检测失败,包括:①对照样本未出现预期结果GD真人GD真人;②浸润癌病灶太小,难以观察到两个浸润癌区域并计数GD真人GD真人;③可计数信号的细胞<75%;④>10%的荧光信号位于细胞核外GD真人GD真人;⑤细胞核结构难以分辨;⑥有强的自发荧光GD真人。(2)外对照:应选择已知FISH阳性和阴性的标本片(或采用厂家提供的对照片)作为外对照GD真人,且杂交染色结果与预期相符。(3)如有可能GD真人,建议设置低扩增对照。


4.关于第17号染色体数目:FISH双探针检测中加入CEPl7探针的目的是为了在检测HER2基因的同时检测第17号染色体数目,从而将第17号染色体的非整倍体和单纯的HER2基因扩增GD真人GD真人GD真人,尤其是低水平的扩增区分开GD真人。但近年来的研究显示整条第17号染色体的多体罕见,CEP17的多体并不能代表整条第17号染色体多体GD真人。部分乳腺癌中第17号染色体存在HER2基因和着丝粒的共同扩增GD真人GD真人GD真人。越来越多的学者认为GD真人GD真人GD真人GD真人,与HER2/CEPl7比值相比GD真人GD真人,HER2拷贝数对于HER2基因扩增的判断更为重要GD真人。因此在HER2 FISH检测结果中除报告HER2/CEPl7比值外GD真人GD真人,还应分别报告HER2拷贝数和CEPl7的数值。


5.关于HER2基因的异质性:浸润性乳腺癌中HER2表达或扩增可存在异质性。虽然HER2基因异质性的临床意义目前仍不明确GD真人,但它可导致IHC与ISH检测GD真人、原发灶与转移灶GD真人、穿刺标本与手术切除标本的检测结果不一致。在ISH计数之前GD真人,应观察整张切片或使用IHC确定可能存在HER2扩增的区域。需要强调的是,即使存在异质性,但只要扩增细胞连续GD真人、均质GD真人GD真人,且占浸润癌10%以上,就应明确报告为ISH阳性GD真人?GD真人?刹钩浔ǜ娌煌赴?>10%)的计数值(包括计数的细胞总数、HER2拷贝数GD真人GD真人、CEPl7数值GD真人、HER2/CEPl7比值),并报告扩增细胞群占所有浸润癌细胞的比例GD真人GD真人。

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